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使用超濾離心管時,需要注意的事項

  • 發(fā)布日期:2022-07-07      瀏覽次數(shù):1494
    •    超濾離心管是一種利用離心技術,用于生物樣品的分離和制備的管狀試樣容器。通過離心機高速旋轉(zhuǎn)提供的巨大離心力,使液體中的微小顆粒沉降,從而和溶液分離。離心管由高質(zhì)量的透明高分子材料聚丙烯制成,廣泛應用于多種試驗操作,滿足生物分析級要求。
        
        使用超濾離心管時,需要注意的事項:
        1、選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質(zhì)的耐受程度有所不同。
        
        2、新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量*過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂?shù)陌拙€為準。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
        
        3、直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。不同離心機的轉(zhuǎn)速rpm換算成g之后,有所不同。離心機的加速度調(diào)至Z低檔,減小對膜的壓力。注意,一定要等離心機達到目的轉(zhuǎn)速之后,方可離開離心機,否則離心機出問題時,無法第一時間處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整(角轉(zhuǎn)離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
        
        4、當濃縮到剩下1ml時,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。
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